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呕吐毒素免疫亲和柱

文章出处:张经理责任编辑:苏微人气: 发表时间2020/3/6 15:16:53【
       呕吐毒素,又名脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,简称DON),是一种由小麦赤霉病菌、禾谷镰刀菌复合群产生的属单端孢霉烯族化合物。据报道,小麦赤霉毒素爆发频率增加,DON成为小麦增产与质量安全的主要威胁,尤其是我国长江流域、黄河流域等重要冬麦区。1998年,在国际癌症研究机构公布的评价报告中,DON被列为第3类致癌物,对人类及动物的健康构成了威胁。欧盟要求供人食用的玉米、燕麦小麦中DON要小于1.75 mg/kg;国内要求谷物及其制品的DON限量也为1.0 mg/kg。
       目前,DON的检测方法主要有酶联免疫法(ELISA)、胶体金免疫层析法(GICA)和高效液相色谱法(HPLC)。其中ELISA法虽操作简单,灵敏度高,但不适合现场检测,且假阳性率高;GICA法虽然适合现场检测,但灵敏度低,不能准确定量。HPLC为国标第二法,前处理需免疫亲和柱净化,成本高、时间长。荧光定量免疫层析是以镧系元素铕的螯合物纳米微球为荧光探针,并结合医学床边检验(POCT)的免疫层析技术,该法因简便、灵敏度高及准确定量等特点,而被广泛应用。
       针对粮食收购、储运及加工等环节,急需快速、灵敏、准确的检测方法。近来黄飚等人主要建立了高灵敏DON时间分辨荧光试剂盒的方法,虽灵敏度很高,但检测时间长,且需要昂贵的96孔时间分辨荧光仪;而肖理文等人对DON时间分辨荧光层析卡的技术性能进行了初探,但制备环节不详。本文依据免疫竞争抑制法构建了DON时间分辨荧光免疫层析方法(TRFIA),重点探讨层析卡制备中微球标记的单抗浓度及TRFIA应用条件,环境温度、层析时间、加样体积及缓冲体系;同时评价该方法的灵敏度、准确度及精密度。以期建立的方法能适用于谷物及其制品中DON的快速定量,保障粮食、食品的质量安全。 
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